Kako bi se spriječila unakrsna kontaminacija tijekom rada, glavni zahtjevi za njegovo projektiranje, izgradnju i upravljanje operacijama su:
1. Projektiranje i konstrukcija laboratorija, siguran radni sistem ili sigurnosni standardni operativni postupci moraju udovoljavati zahtjevima trenutnog&"Opći zahtjevi za laboratorijsku biološku sigurnost GG"; GB19489.
2. PCR je podijeljen u četiri funkcionalna područja prema radnim koracima, a to su područje skladištenja i pripreme reagensa, područje pripreme uzorka, područje amplifikacije i područje analize proizvoda za pojačavanje. Ako je opremljen fluorescentnim PCR instrumentom u stvarnom vremenu, područja za pojačavanje i analizu proizvoda mogu se kombinirati. Svako funkcionalno područje mora biti jasno označeno, a oprema i predmeti u različitim funkcionalnim područjima ne smiju se miješati.
Smjer strujanja zraka u PCR laboratoriji može se provesti u skladu s područjem skladištenja i pripreme reagensa → područja pripreme uzorka → područja amplifikacije → područja pojačanog ispitivanja proizvoda kako bi se spriječilo da amplificirani proizvodi uđu u prethodno pojačano područje zajedno s protokom zraka. Može se izvesti na način smanjenja tlaka zraka iz prostora za skladištenje i pripremu reagensa → područje pripreme uzorka → područje amplifikacije → područje analize proizvoda za pojačavanje. To se može postići ugradnjom ispušnih ventilatora, uređajima za ispuh negativnog pritiska ili drugim izvedivim metodama.
3. Ulazak u svako radno područje treba strogo slijediti jedan smjer, odnosno područje skladištenja i pripreme reagensa → područje pripreme uzorka → područje amplifikacije → područje analize proizvoda za pojačavanje. Treba koristiti različite radne površine (poput različitih boja). Radnici ne smiju vaditi radnu odjeću kad napuste svako radno područje.
4. Čišćenje laboratorija treba obaviti u smjeru skladišta i pripreme reagensa → područje pripreme uzorka → područje amplifikacije → područje pojačanog ispitivanja proizvoda. Različita eksperimentalna područja trebaju imati vlastite uređaje za čišćenje kako bi se spriječila unakrsna kontaminacija.
5. Nakon završetka radova, radno područje se mora odmah očistiti. Površina laboratorijske klupe u radnom području trebala bi biti u stanju da izdrži dezinfekciju i efekte čišćenja hemikalija poput natrijum-hipoklorit. Ultrazvučno zračenje na površini laboratorijske klupe trebalo bi biti prikladno i učinkovito. Budući da su udaljenost i energija ultraljubičastog zračenja vrlo kritična za dekontaminacijski efekt, može se koristiti pomična ultraljubičasta svjetiljka (valna dužina 254nm), a nakon završetka rada može se prilagoditi ozračivanju unutar 60-90cm na eksperimentalnom stolu . Budući da je pojačani proizvod samo nekoliko stotina ili desetina baznih parova (bp), nije osjetljiv na oštećenja UV-zrakom, pa se UV-zračeni pojačani fragment mora zračiti duže vrijeme, poželjno preko noći.
Funkcije područja skladištenja i pripreme reagensa su: priprema skladišnih reagensa, raspršivanje reagensa i priprema reakcijske smjese za pojačavanje, kao i skladištenje i priprema potrošnog materijala kao što su epruvete i vrhovi centrifuge. Materijali poput skladišnih reagensa i potrošnog materijala koji se koriste za pripremu uzorka trebaju se direktno transportirati u područje skladištenja i pripreme reagensa i ne mogu proći kroz područje otkrivanja pojačanja. Materijali za pozitivnu kontrolu i materijali za kontrolu kvalitete u kompletu ne smiju se skladištiti na ovom području, već se trebaju skladištiti na ovom području. Područje obrade uzorka.
Funkcija područja pripreme uzorka je: ekstrakcija, skladištenje i dodavanje u epruvetu za pojačavanje nukleinske kiseline (RNA, DNA). Za operacije koje uključuju kliničke uzorke, treba ispuniti zahtjeve za zaštitnu opremu, ličnu zaštitu i operativne specifikacije za sekundarne laboratorije za biološku sigurnost. Budući da može doći do kontaminacije aerosolom za vrijeme miješanja uzoraka i pročišćavanja nukleinskom kiselinom, na ovom se području mogu uspostaviti uvjeti pozitivnog tlaka kako bi se izbjegla kontaminacija aerosola iz susjednih područja. Da bi se izbjegla unakrsna kontaminacija između uzoraka, nakon dodavanja nukleinske kiseline koja se testira, reakcijska cijev koja sadrži reakcijsku smjesu mora biti pokrivena. Kod potencijalno zaraznih materijala poklopac se mora otvoriti u kabinetu za biološku sigurnost i moraju postojati jasni postupci za rukovanje uzorcima i inaktiviranje.
Funkcija zone amplifikacije je: sinteza DNA, amplifikacija i detekcija DNK. Kako bi se izbjeglo zagađenje koje uzrokuje aerosol, šetnja po tom području trebala bi biti svedena na minimum. Mora se primijetiti da se sve ispitivane reakcijske epruvete ne smiju otvarati na ovom području.
Funkcija pojačanog područja analize proizvoda je: daljnja analiza i određivanje amplificiranih fragmenata, poput hibridizacije, elektroforeza digestije enzima, denaturacija analize tekućina visokih performansi, sekvenciranje itd. Proizvodi za amplifikaciju nukleinske kiseline imaju različite metode analize, poput metoda hibridizacije sonde. na membranama ili na mikro pločicama ili čipovima (označavanje radionuklidom ili neradioaktivno nuklidno označavanje), direktnom ili digestiranom elektroforezom agaroznog gela, elektroforezom poliakrilamidnog gela, južnim prenosom, postupcima sekvenciranja nukleinskih kiselina, masenom spektrometrijom itd.
Područje analize amplifikacijskog proizvoda glavni je izvor onečišćenja proizvoda za amplifikaciju u laboratoriji PCR, tako da treba paziti da proizvod amplifikacije ne bude izveden kroz predmete i radnu odjeću u ovom području. Kada se koristi PCR-ELISA metoda za otkrivanje pojačanih proizvoda, za pranje ploča mora se koristiti mašina za pranje ploča, a otpadna tečnost mora biti sakupljena u 1 mol / L HCl i ne može se sipati u laboratoriju, već je treba odbaciti iz laboratorija PCR. Spusti. Korišteni vrh se također mora namočiti u 1 mol / L HCl i zatim staviti u vreću za smeće za odlaganje prema postupcima, poput spaljivanja. Kako se u ovom području mogu koristiti određene genetske mutacije i toksične tvari poput etidijum bromida, akrilamida, formaldehida ili radionuklida itd., Treba obratiti pažnju na sigurnosnu zaštitu eksperimenata.